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TECHNICAL ARTICLES
轉染是將外源性核酸（DNA或RNA）采用各種化學、生物學或物理方法導入細胞，從而實現對細胞基因功能的蛋白質表達研究。生成重組蛋白，或特異性地增強或抑制轉染細胞中的基因表達是轉染實驗的主要目的。因此，轉染是一種功能強大的分析工具，可用于基因或基因產物的功能和調控研究，用于生成轉基因生物，并可用作基因治療方法。常規的轉染技術主要分為瞬時轉染和穩定轉染，怎么選擇瞬時轉染和穩定轉染呢？選擇瞬時轉染還是穩定轉染，具體取決于您要開展的實驗的時間范圍和最終目標。瞬時轉染細胞一般在轉染后24...
轉染細胞的方法有很多，這里介紹一種比較經濟實用的轉染試劑--聚乙烯亞胺(即PEI)。PEI（polyethylenimine）是一種帶有高電荷陽離子的多聚物，非常容易結合帶負電荷的DNA分子，形成復合物，并轉染到貼壁和懸浮細胞中，常用于大規模瞬時轉染表達。在HEK293和CHO等細胞中轉染效率較高。那么如何利用PEI轉染細胞呢？實驗前準備：PEI(polysciences,Cat#:24765-1),將PEI配置成1ug/ml，用0.2μm濾膜過濾，并分裝儲存于負80度。實驗...
Co-IP（免疫共沉淀，co-inmunoprecipitation）是經典的利用抗體從樣品中捕獲靶蛋白及其互作蛋白、復合體的一項技術，能夠特異性富集所研究的目的蛋白。免疫共沉淀Co-IP實驗步驟細胞轉染1.鋪細胞，轉染細胞。本次轉染的兩個蛋白分別帶有FLAG和HA標簽。裂解細胞2.去除培養基，PBS吹下細胞，離心去上清。將細胞沉淀轉移到1.5mlEP管中，PBS洗，離心去上清，加1ml裂解液。3.冰上孵育40min，每10min震蕩一次。4.超聲破碎細胞結構和打斷染色質。冰...
關于細胞轉染，有許多常用的轉染試劑。下面簡單介紹下Lipo3000轉染細胞的步驟及注意事項。實驗準備：Lipofectamine™3000轉染試劑、Opti-MEM（可以用無血清的培養基代替）實驗步驟：1.接種細胞，使其在轉染時達到70–90%匯合度。注：對于HEK293，6孔板一般鋪50萬個細胞左右。對于PC9,24孔板一般鋪5-10萬個細胞。由于不同細胞，生長狀況不太一樣，需要根據情況調整。2.使用Opti-MEM™培養基稀釋Lipofectami...
啟動子是一段位于結構基因5’-端上游區的DNA序列，能活化RNA聚合酶，使之與模板DNA準確地結合，并具有轉錄起始的特異性。基因的特異性轉錄取決于酶與啟動子能否有效地形成二元復合物。那啟動子有哪些特征？①序列特異性。在啟動子的DNA序列中，通常含有幾個保守的序列框，序列框中堿基的變化會導致轉錄啟動活性的改變。②方向性。啟動子是一種有方向性的順式調控元件，有單向啟動子和雙向啟動子兩類。③位置特性。啟動子一般位于所啟動轉錄基因的上游或基因內的前端。處于基因的下游或在基因的上游但離...
聚合酶鏈反應（PolymeraseChainReaction)簡稱PCR，是一種體外高效擴增特定DNA片段的分子生物學技術。該技術的發明人是KaryMullis，他從1983年開始研究PCR技術，1985年開始被逐漸采用，成為分子生物學的一項常規手段，并得到了廣泛的應用，在臨床診斷、生物醫學研究和法醫學領域都具有重要意義。PCR是在體外模擬體內DNA復制的過程，它用加熱的辦法讓需要擴增的DNA片段變性解鏈成兩條單鏈，人工合成的一對引物讓它們結合到DNA模板（分別結合到兩條鏈上...
轉染，顧名思義，是指將某種物質轉移到細胞內，是分子生物學和細胞生物學研究的重要技術。在生物醫學研究中，這個“物質”通常指的是DNA或RNA。通過轉染，我們可以向細胞引入新的基因，或者沉默或敲低細胞內的某個基因，從而進行基因功能研究、基因表達調控，或是進行基因治療等。在實驗過程中，選擇哪種細胞受體也有一定要求，本期我們就來了解一下常用于轉染的細胞類型有哪些吧？常用于轉染的細胞包括原代細胞、原代細胞衍生物、腫瘤細胞系、幼倉鼠腎細胞（BHK-21）、人胚腎細胞（HEK-293）、人...
目前，將外源DNA導入哺乳動物細胞的方法大致可分為兩大類，即生物方法和物理化學方法。生物方法主要以病毒作為載體，通過病毒感染的方式將外源DNA導入到細胞中，其中以逆轉錄病毒及腺病毒轉染系統最為常用。物理化學方法中常用的有磷酸鈣法、脂質體介導的轉染、顯微注射、電穿孔，以及最近出現的以高分子聚合物為載體的基因傳遞技術。其中常用的是化學方法，磷酸鈣、聚乙烯亞胺（PEI）、脂質體等化學試劑較為常用，那么接下來著重探討一下PEI轉染試劑的作用原理及比較吧。PEI轉染試劑的作用原理使用廣...
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