目前，將外源 DNA 導入哺乳動物細胞的方法大致可分為兩大類，即生物方法和物理化學方法。生物方法主要以病毒作為載體，通過病毒感染的方式將外源 DNA 導入到細胞中，其中以逆轉錄病毒及腺病毒轉染系統最為常用。物理化學方法中常用的有磷酸鈣法、脂質體介導的轉染、顯微 注射、電穿孔，以及最近出現的以高分子聚合物為載體的基 因傳遞技術。其中常用的是化學方法，磷酸鈣、聚乙烯亞胺（PEI）、脂質體等化學試劑較為常用，那么接下來著重探討一下PEI轉染試劑的作用原理及比較吧。

PEI轉染試劑的作用原理

使用廣泛的陽離子聚合物轉染試劑是PEI。PEI制備簡單，價格便宜，有線狀和枝狀兩種商業試劑可選。自19世紀 70年代發現PEI可以結合DNA質粒，直到20年后，PEI才真正用于哺乳動物細胞轉染，成為非常有潛力的非病毒質粒載體試劑。由于PEI帶正電荷，與帶負電荷的DNA結合形成帶正電荷的PEI-DNA復合物，可以與帶負電荷的細胞表面結合。PEI-DNA復合物通過胞吞作用進入細胞內部形成內涵體，之后一部分從內涵體中逃逸進入細胞核內，未逃逸的進入溶酶體被降解，無法入核的DNA會在100min內被胞漿中的DNA酶降解（如下圖）。每毫升轉染試劑和質粒混合物形成約1×1010個DNA/PEI復合物，大小為300nm左右。經過15min孵育，轉染時每個細胞進入約250個 DNA/PEI 復合物。

不同 PEI 的比較

枝狀的800kD PEI是shou次報道的可用于多種細胞轉染的試劑，枝狀的25kD PEI（25B）用于HEK293細胞大規模瞬時轉染，其轉染效率較枝狀2kD、600kD、800kD 或線狀22kD PEI（22L）的高。 之后比較了枝狀70kD、50 ~ 100 kD、25kD PEI和線狀25 kD PEI（25L），結果表明25B和25L的轉染效率較高，適合于哺乳動物細胞轉染，但是 25L比25B更適用于懸浮哺乳動物細胞HEK293和CHO轉染。

polysciences轉染試劑

成立于1961年的美國Polysciences公司，是一家歷史久遠的化學品制造公司，產品廣泛應用于各個科研領域。Polysciences在PEI的制造工藝上具有長達20多年的經驗，其經典的PEI產品系列包括研究級產品PEI 25K，PEI MAX和Transporter 5，以及cGMP級MAXgene GMP（Figure 1），被廣泛用于抗體藥物和重組蛋白，臨床等級慢病毒和AAV病毒的大規模生產，為全球客戶提供成本效益高、供應穩定和質量可靠的選擇。在過去10年期間，相關產品已被用于國內外多項臨床申報。

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