牛痘病毒加帽酶 ELISA 檢測試劑盒說明書

貨號：HG-VC001

產品簡介：

帽子結構是真核生物中 mRNA 經轉錄后修飾在 5'端形成的一個特殊結構。牛痘病毒加帽酶是催化形成帽子結構的有效酶。因此對使用了牛痘病毒加帽酶的生物制品，需要對其殘留量進行檢測。

本試劑盒采用雙抗夾心酶聯免疫檢測(ELISA)法，將牛痘病毒加帽酶標準品和待測樣本加入預包被抗牛痘病毒加帽酶抗體的酶標板，然后加入稀釋后的生物i素標記的牛痘病毒加帽酶檢測抗體，最后加入 Streptavidin-HRP，形成抗體+抗原+抗體。Biotin+ SA-HRP 復合物，洗板后加入 TMB 顯色液顯色。TMB 在 HRP 酶的催化下由無色轉化成藍色并在終止液的作用下最終轉化成黃色。黃色的深淺與樣本中被檢測到的牛痘病毒加帽酶的量呈正相關。

檢測范圍: 0.125~8 ng/mL

定量限:0.125ng/mL

規格：

96T

應用：

適用于生物制品純化工藝過程的優化、中間工藝過程的雜質控制以及終產品的放行檢測。

試劑盒組成：

備 注:所有組分存儲溫度均為 2~8℃，有效期12個月。

需自行準備的材料

◆酶標儀

◆去離子水

◆恒溫培養箱

◆全新濾紙

◆微量移液器及吸頭

◆渦旋振蕩器

實驗前準備

1.所有試劑以及待測樣本需要恢復室溫。所有試劑現配現用。

2.1x洗液配制:濃縮洗液平衡至室溫(18~25°C)，不要有結晶。混勻后根據用量，取適量用超純水按 1:19 的比例，將20x洗液稀釋 20 倍，最終得到1x洗液。

3.1x 檢測抗體配制:100x檢測抗體充分溶解后，離心，取適量然后用稀釋液2以1:99 的比例進行稀釋。
4.1x酶結合物配制:500x酶結合物充分溶解后，離心，取適量然后用稀釋液2以1:499 的比例進行稀釋。
5.標準品的制備：

準備8個 1.5mL 離心管，按照標準品濃度依次標記。取一支凍干標準品加入 1mL 稀釋液 1，徹i底溶解后靜置 10 分鐘，所得溶液濃度為 8ng/mL。各離心管分別加入 300uL 稀釋液 1，再依次按下圖進行梯度稀釋:

操作步驟

使用前所有試劑組分以及待測樣本需要恢復室溫(18~25°C)。建議所有的標準品和待檢樣本進行雙復孔測定。

1. 試劑準備:提前準備好各種待測試劑、稀釋好的標準品和待測樣本。

2.酶標板條確定:計算待測樣本和標準品所需酶標板條，將酶標條從鋁箔袋取出，剩余的酶標條放回鋁箔袋中并封好袋口，低溫保存。

3.浸泡酶標板:加入 1xWash Buffer(300 μL/)浸泡酶標板，靜置 30 秒后棄去孔中液體，拍干酶標板。洗板對試驗結果有重要影響，確保最后一次拍板沒有洗液殘留。

4.樣本孵育:加入標準品和待測樣本，100 uL/孔，確保 15 min 內完成點樣，37℃靜置孵育1h。

5.洗板:棄去孔中液體，加入1xWash Buffer(300 μL/孔)洗板五次，拍干酶標板。

6.檢測抗體孵育:將 1x 檢測抗體加入酶標板中，100 μL/孔，37°C靜置孵育1h。

7.洗板:棄去孔中液體，加入1xWash Buffer(300 μL/孔)洗板五次，拍干酶標板。

8.酶結合物孵育:將 1x 酶結合物加入酶標板中，100 μL/孔，37℃℃靜置孵育 40 min。

9.洗板:棄去孔中液體，加入1xWash Buffer(300 μL/孔)洗板五次，拍干酶標板。

10.顯色:使用前的10 min 將底物液恢復至室溫(18~25°C)，將底物液 TMB加入酶標板中，100 uL/孔，37℃避光孵育 15min。

11.終止:加入 50 uL/孔終止液至酶標板中，輕輕震動酶標板至顯色均勻。

12.讀值:20 min 內讀取 450nm/630nm 波長處的吸光度值。450nm 作為檢測波長，630nm 作為參比波長。

結果處理

1. 標準曲線OD處理（見下例，僅為示例，具體以實際測定為準）

2. 標準品理論濃度與對應 OD 值以四參數進行擬合，得到標準曲線(如下圖所示)。

注意事項

1.樣品首i次檢測，建議進行至少3個連續倍數的稀釋，以在標準曲線范圍內產生至少一個稀釋后樣品。

2.試劑按標簽說明儲存，使用前室溫(18~25℃℃)平衡。3.包被酶標板使用前，請平衡至室溫(18~25°C)再打開外包裝袋，實驗中不用的板條立即放回包裝中密封，4℃可保存一個月。其余不用試劑應包裝好或蓋好。

4.實驗操作中請使用一次性的吸頭，避免交叉污染。

5.使用前檢查試劑盒內各種試劑。試劑稀釋、加樣和終止反應應充分混勻或搖勻對實驗結果尤為重要。

6.洗滌過程中反應孔中殘留的洗滌液應在潔凈的紙中上充分拍干，直至看不到水印。勿將紙巾直接放入反應孔中吸水。

7.底物顯色液對光敏感，避免長時間暴露于光下，避免與金屬接觸影響結果。

8.本產品為一次性使用的試劑盒，請在效期內使用。

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