CCK-8試劑盒是一種基于WST-8的試劑盒，用于細胞增殖和細胞毒性的快速、高靈敏度檢測等，具有使用方便，檢測快速，靈敏度高，重復性優(yōu)于MTT法，毒性小，適合于高通量藥物篩選等大規(guī)模實驗應用的優(yōu)點。以下是使用CCK-8試劑盒進行細胞增殖檢測的步驟：

一、細胞增殖分析

1.培養(yǎng)細胞并將其接種到96孔板中。

2.在37℃、5% CO2、90%濕度條件下培養(yǎng)24小時。

3.配制不同濃度梯度的樣本溶液，如300、100、33.3、11.1、3.7、1.2、0.4、0.14uM。

4.每個濃度三個復孔加入到96孔板中，在37℃、5% CO2、90%濕度條件下培養(yǎng)適當時間長度。如6，12，24或48小時。

5.在CCK-8試劑盒中加入10μL的CCK-8溶液。

6.在37℃、5% CO2、90%濕度條件下培養(yǎng)0.5-4小時。

7.用酶標儀在450 nm處測量吸光度。

8.用Excel及Graphpad Prism處理并分析結(jié)果。

二、細胞毒性分析

1. 制備細胞懸液：細胞計數(shù)

2. 接種到96孔板中：根據(jù)合適的鋪板細胞數(shù)，每孔約100ul細胞懸液，同樣的樣本可做3個重復。

3. 37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)：細胞接種后貼壁大約需要培養(yǎng)2-4小時，如果不需要貼壁，這步可以省去。

4. 加入不同濃度的毒性物質(zhì)

5. 37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)：加入毒性物質(zhì)的培養(yǎng)時間，要看毒性物質(zhì)的性質(zhì)和細胞的敏感性，一般要根據(jù)細胞周期來決定，起碼要一代以上的時間。

6. 加入10ulCCK8：由于每孔加入CCK8量比較少，有可能因試劑沾在孔壁上而帶來誤差，建議在加完試劑后輕輕敲擊培養(yǎng)板以幫助混勻。

7. 培養(yǎng)1-4小時:細胞種類不同，形成的Formazan的量也不一樣。如果顯色不夠的話，可以繼續(xù)培養(yǎng)，以確認最佳條件。特別是血液細胞形成的Formazan很少，需要較長的顯色時間（5-6小時）。

8. 測定450nm吸光度：建議采用雙波長進行測定，檢測波長450-490nm，參比波長600-650nm。

本期內(nèi)容：CCK-8試劑盒進行細胞增殖檢測的步驟是怎樣的？

下期內(nèi)容：直擴pcr技術的使用場景及常見問題