酶聯免疫吸附測定（enzyme linked immunosorbent assay，簡寫ELISA）指將可溶性的抗原或抗體結合到聚苯乙烯等固相載體上，利用抗原抗體特異性結合進行免疫反應的定性和定量檢測方法。ELISA是分子生物學、免疫學和細胞生物學研究中常用到的實驗操作之一，一起來了解一下ELISA實驗的具體步驟吧！

1. 涂覆：將待檢測的抗原或抗體溶液加入到微孔板（通常是96孔板）中，并在孔板表面上形成一層固定的抗原或抗體。這個過程被稱為涂覆。

2. 阻斷：為了防止非特異性結合，需要在涂覆后加入一種阻斷劑，例如牛血清蛋白（BSA）或牛奶粉，以覆蓋孔板上未被固定的表面。阻斷劑可以減少非特異性結合和降低背景信號。

3. 樣品加入：將待測樣品加入到微孔板中，樣品中的目標抗原或抗體與固定在孔板上的抗體或抗原相互作用。

4. 洗滌：通過反復洗滌孔板，去除未結合的物質，以減少背景信號。

5. 探針加入：加入與待測物體特異性結合的酶標記二抗（例如辣根過氧化物酶-HRP）或酶標記抗原，使其與樣品中的目標物體結合。

6. 洗滌：再次洗滌孔板，去除未結合的酶標記物。

7. 底物加入：加入一種底物，其與酶標記物相互作用，產生可測量的信號。常用的底物是一種可被酶催化產生顏色或熒光的物質。

8. 反應停止：通過加入一種停止劑，停止底物的反應，阻止信號進一步增加。

9. 信號測量：使用光譜儀或熒光測量儀測量底物反應產生的信號，根據信號的強度來確定樣品中目標物體的濃度。

本期內容：ELISA實驗的具體步驟

下期內容：ELISA空白背景高的常見原因和處理方法